利用高壓制備液相色譜裝備對千層塔中的石杉堿甲進(jìn)行了分離提純放大研究，考察了填料大小、柱尺寸大小與上樣...

     近年來(lái)，從自然資源中提取具有生物活性化合物的研究日益引起了人們的廣泛關(guān)注。源于植物中的抗腫瘤藥物紫杉醇及抗瘧活性成分青蒿素的發(fā)現促使人們特別是工業(yè)界人士開(kāi)展更廣泛的研究。研究人員竭力研究高效的分離篩選方法，試圖從植物、海洋生物及微生物等自然資源中發(fā)現新的有效化合物，同時(shí)也需要一個(gè)快速、有效的分離方法以分離目標化合物。因此，學(xué)術(shù)界及工業(yè)界都需要有效的制備分離技術(shù)及其應用經(jīng)驗。
高壓制備液相色譜是一種使用高壓、大流量輸送系統在高分辨率、大內徑、高載量分離柱上進(jìn)行樣品高純度分離的液相色譜制備方法。應用該方法分離的產(chǎn)品在純度、回收率、分離效率等方面遠遠優(yōu)于傳統的制備方法，因此在生物制品、藥物研究和生產(chǎn)領(lǐng)域都得到了廣泛應用。 
在對高壓制備液相色譜分離純化過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化時(shí)，影響分離純化效果的因素有很多，包括填料尺寸大小、色譜柱的柱徑、柱長(cháng)、上樣量以及流動(dòng)相的組成、流速等。將分析系統放大到制備型液相色譜意味著(zhù)需要使用更大的制備柱、更高的流速和根據色譜柱的長(cháng)度增加進(jìn)樣量，在分析型液相色譜中，研究者已廣泛研究過(guò)填料尺寸、柱尺寸大小以及上樣方式等對分離效率的影響，但對制備型液相色譜分離純化過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化的研究卻鮮有報道。
本文利用自行生產(chǎn)的高壓制備液相色譜裝備，對千層塔中的石杉堿甲的制備分離過(guò)程進(jìn)行了實(shí)驗研究，著(zhù)重考察了填料大小、柱尺寸大小以及上樣方式對柱效和分離度的影響。
1  實(shí)驗部分
1.1  儀器和試劑
DASIO C18填料（dp=10、20、30、40 μm，蘇州麥可旺志生物技術(shù)有限公司）；高壓制備液相色譜柱（ID 50 mm×650 mm、ID 50 mm×1 000 mm、ID 150 mm×650 mm）；動(dòng)態(tài)軸向加壓液壓站（聊城萬(wàn)合工業(yè)制造有限公司）；制備高壓輸液泵：GLP3250；紫外-可見(jiàn)檢測器：UC-3292；Rheodyne3725i六通進(jìn)樣閥；色譜工作軟件及電腦。此外，還有高效液相色譜儀、高速離心機、旋轉蒸發(fā)儀。
氯仿、甲醇、氨水、硫酸、氫氧化鈉、純水均為分析純，石杉堿甲對照品（99.1%含量）。千層塔來(lái)源于重慶，經(jīng)鑒定符合中華人們共和國藥典（2010版）規定，均為分析純試劑，使用前先經(jīng)過(guò)整流處理再用孔徑為0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾。
1.2  工藝流程及方法
　　本文所建立的高壓制備液相色譜裝備分離工藝流程如圖1所示。樣品被注入色譜柱后，通過(guò)高壓制備輸液泵的壓力使洗脫液帶動(dòng)樣品在固定相中移動(dòng)，樣品組分依據兩相間作用能力的差別達到分離的目的，分離后的各組分經(jīng)檢測器檢測，再經(jīng)過(guò)工作站軟件和數據處理系統的運算處理以圖譜的形式呈現，最后通過(guò)餾分收集器分通道收集。