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徑向高壓圓筒柱的研究與開(kāi)發(fā)

2014-08-14查看:

本文論述了一種全新的加壓制備色譜柱:徑向高壓圓筒柱。其中主要說(shuō)明了敏感化合物、天然產(chǎn)物的快速分離需要...
一、概述
  色譜技術(shù)是一項通過(guò)物質(zhì)在兩相之間的作用力不同造成的保留時(shí)間不同而使得混合物質(zhì)中的各組分相互分離的技術(shù)體系??梢哉f(shuō),色譜過(guò)程就是一個(gè)分離過(guò)程。
  高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一種高效的分離和分析技術(shù),它能將各種樣品中各個(gè)不同的組分迅速分離,然后逐一加以定性和定量分析。HPLC在分離純化技術(shù)中的應用是近十幾年來(lái)才得到較大的發(fā)展。與傳統的分離純化方法相比,它的快速、高效以及自動(dòng)化的操作引起了制藥業(yè)的關(guān)注。HPLC正成為藥物分離純化技術(shù)中的發(fā)展主流。
  藥物與人類(lèi)的健康關(guān)系極大。許多藥品由于受到純度的影響,藥效不能充分發(fā)揮,甚至產(chǎn)生毒副作用。有的在使用前需要做各種試驗,帶來(lái)很多麻煩。外消旋體藥物是典型的例子之一。它由左旋和右旋兩種光學(xué)異構體組成,不同的異構體藥理與療效完全不同。以往由于分離與純化能力的限制,市場(chǎng)上常以混合物即外消旋體出售。美國FDA(食品和藥品管理局)和西方許多國家都已經(jīng)作出了禁止外消旋體藥物在市場(chǎng)上銷(xiāo)售的決定,必須把它分離成單一的左旋或右旋體才能作為產(chǎn)品上市。所以,藥物產(chǎn)品對分離與純化提出了更高的要求。
  目前,液相色譜是分離與純化領(lǐng)域中處理多組分復雜體系的最有效方法。HPLC方法又是分離與純化藥物的最佳選擇。
  高效液相色譜的應用范圍廣泛。對于氣相色譜很難分析的熱不穩定化合物、高沸點(diǎn)不揮發(fā)化合物和離子型化合物,它都能分析。氣相色譜分析對象的分子量一般不超過(guò)幾百,而液相色譜可以處理分子量在幾百以上的各種類(lèi)型化合物,即使是分子量高達幾萬(wàn)、幾十萬(wàn)的高聚物,液相色譜也可以完成分析工作。當然,對于小分子量非極性化合物或氣體,液相色譜是無(wú)力分析的。據估計,在已知的全部有機化合物中,能用氣相色譜分析的大體占25%,其余則主要借助于液相色譜。
  制備液相色譜是高效液相分析色譜的基礎上進(jìn)行放大設計,是將分析色譜中的發(fā)現某種物質(zhì)的過(guò)程變成提取或分離某種物質(zhì)。它是目前在分離科學(xué)中最有效的制備性分離技術(shù),也是很多研究領(lǐng)域和生產(chǎn)車(chē)間必不可少的分離手段。
  分離柱是制備液相色譜中重要的執行機構。制備液相色譜對分離柱的基本要求是柱效高、選擇性好、分離速度快。
  隨著(zhù)科技的發(fā)展,人們發(fā)現在分離柱的柱床上面加壓在液相色譜中可以發(fā)揮下列兩方面作用(a和b)或其中之一:
(a)加快洗脫劑的流速,提高分離速度;
(b)允許在分離過(guò)程中使用顆粒度更小的吸附劑,從而獲得更高的分辨率。
  因此,有了動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱(DAC)的出現。在使用過(guò)程中,色譜柱內的活塞依靠與之相連接的液壓油缸始終產(chǎn)生一個(gè)相對恒定的壓力壓縮柱床填料,隨時(shí)消除洗脫過(guò)程中因為填料顆粒相對移動(dòng)產(chǎn)生的死空間。動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱使用良好,能夠滿(mǎn)足很多目標產(chǎn)品的純化分離要求,最大的優(yōu)點(diǎn)是適用于大規模的工業(yè)生產(chǎn)。但是對于實(shí)驗室研究階段的產(chǎn)品的工藝性分離,動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱則顯得粗大笨重,操作不方便,而且昂貴。因為在實(shí)驗室里,不同的目標物,不同的工藝方法,需要不同的填料作為固定相或固定相的載體。
  尤其是,敏感化合物在進(jìn)行長(cháng)時(shí)間的常壓色譜分離時(shí),其結構可能會(huì )發(fā)生變化,被分解和色帶拖尾,這兩個(gè)問(wèn)題在天然產(chǎn)物的分離中經(jīng)常會(huì )遇到。這時(shí),最基本的要求就是縮短分離時(shí)間,實(shí)現快速分離,以避免這種變化的發(fā)生。
  徑向高壓圓筒柱正是為了滿(mǎn)足這種需要而研制的。
二、徑向高壓圓筒柱的基本結構和技術(shù)特點(diǎn)
    徑向高壓圓筒柱單元體主要包括:高壓柱筒組件、柱外套筒、柱筒法蘭組件、裝柱口、外接口、柱內填料等幾個(gè)部分。

  其中:高壓柱筒是徑向高壓圓筒柱的關(guān)鍵部件。它包括由兩個(gè)316L材質(zhì)的柱筒內壁管和柱筒外壁管套裝形成的圓筒柱主體部分,和篩板、配流板等重要輔助零件。在柱筒的內、外壁管上鑲嵌有微孔篩板,其孔徑小于柱內填料直徑。同時(shí),在柱筒的內、外壁管上設計有強制約束液體流向和流量的配流板,以保證流入高壓柱筒的液流在圓筒展開(kāi)面上的每一個(gè)微分面積上流量相等。
  柱外套筒起到總體支撐作用,同時(shí)與柱筒外壁管封閉,形成液流外腔體,即液流分配或收集腔體。在設計時(shí),這個(gè)腔體在滿(mǎn)足液流分配的基礎上需要容積盡量小,目的是減小死體積,避免樣品或目標物的在試劑中的擴散。
  柱筒內壁管的管內空間形成徑向圓筒柱的內腔體,與液流外腔體容積盡量小的要求相同,為內腔體設計了填充部件,填充部件的材質(zhì)為聚醚醚酮(PEEK)和316L不銹鋼兩種,供使用者選擇。
  柱筒法蘭封閉整個(gè)高壓柱筒結構。在柱筒法蘭上設計有裝柱入液口、裝柱出液口和兩個(gè)為流動(dòng)相提供的外接口。
  柱內填料按照具體工藝要求選定。
三、徑向高壓圓筒柱的裝填與應用
1、裝填
  徑向高壓圓筒柱配備有專(zhuān)用的裝柱機。裝柱機的操作比較容易,可以參照說(shuō)明書(shū),在較短的時(shí)間里學(xué)會(huì )操作。
  裝柱前需要將填料加入勻漿液中攪勻,成稀糊狀,裝柱機能夠同時(shí)輸出稀填料和裝柱液。
  裝柱時(shí)首先關(guān)閉兩個(gè)流動(dòng)相外接口,同時(shí)打開(kāi)裝柱出液口。稀糊狀的填料和裝柱液被裝柱機以低速、高壓液流注入裝柱口,流到出液口位置,填料被篩板阻擋,在裝柱出液口開(kāi)始不斷向上  沉積,裝柱液的高壓沖刷使得柱筒內的填料趨向均勻密實(shí),直至充滿(mǎn)整個(gè)柱筒。
  繼續高壓沖洗柱筒內的填料,平衡柱內壓力,以形成穩定的柱床。
  斷開(kāi)裝柱管路,并關(guān)閉裝柱口和裝柱出液口,將徑向高壓圓筒柱移開(kāi),備用。
2、應用
  在進(jìn)行分離工作之前,確認裝柱口和裝柱出液口處于關(guān)閉狀態(tài)。根據不同的樣品和分離策略,徑向高壓圓筒柱可以選擇兩種不同的工作模式,即內腔入外腔出(以外接口一為進(jìn)液入口)和外腔入內腔出(以外接口二為進(jìn)液入口)。
  內腔入外腔出的工作模式如下圖。

四、結語(yǔ)
  作為一種全新的制備色譜柱模式,徑向高壓圓筒柱的最大特點(diǎn)是靈活、便捷,使用者可以根據自己的需要選配不同的柱筒,裝填不同的填料。
  以柱床面積60cm2,柱床厚度5cm為例,如果選用動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱,至少需要直徑20cm的柱管,即DAC200動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱。反之,如果選擇徑向高壓圓筒柱,選擇之一:柱床內壁2cm,柱床外壁12cm,高度10cm。選擇之一:柱床內壁4cm,柱床外壁14cm,高度5cm。當然也可以按照柱內填料的總體積進(jìn)行選擇。
  不管是那一種選擇,對于大面積薄層色譜來(lái)說(shuō),徑向高壓圓筒柱與動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱相比,都有著(zhù)使用方便,價(jià)格低廉的優(yōu)勢。按照目前市場(chǎng)上的情況,在以上選擇中,設備的購置成本:S(動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱):S(徑向高壓圓筒柱)=3:1。
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